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分享一下NEST細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)哪些問(wèn)題
點(diǎn)擊次數(shù)：2057 更新時(shí)間：2020-09-21
NEST細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)它不了解的朋友可能會(huì)覺得它很神秘，其實(shí)它的秘密很簡(jiǎn)單，一個(gè)24孔板中一個(gè)大孔中包括1200個(gè)400um的倒置微孔，能將捕獲的單個(gè)iPS培養(yǎng)成類胚體，可以培養(yǎng)50至3000個(gè)一樣大小的細(xì)胞團(tuán)!當(dāng)你向培養(yǎng)板中加入細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞會(huì)均勻的落入每個(gè)微孔孔中！它廣泛的應(yīng)用于iPS/ES培養(yǎng)成類胚體！
下面我就來(lái)給大家分享下NEST細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題：
一、細(xì)胞成長(zhǎng)曲線測(cè)守時(shí)為什么要做重復(fù)孔?
答：測(cè)定細(xì)胞成長(zhǎng)曲線細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)挑選3個(gè)復(fù)孔，每孔分別計(jì)三次，取其平均值，目的是減小操作差錯(cuò)。
二、為什么制作的細(xì)胞成長(zhǎng)曲線沒有到達(dá)平臺(tái)期?
答：可能有以下原因：一是細(xì)胞接種密度過(guò)低;二是細(xì)胞培育時(shí)刻過(guò)短;三是細(xì)胞成長(zhǎng)狀況欠好，使其不能正常增殖。
三、怎么挑選細(xì)胞接種數(shù)?
答：可根據(jù)細(xì)胞傳代培育過(guò)程中接種數(shù)及細(xì)胞成長(zhǎng)周期進(jìn)行核算，細(xì)胞接種數(shù)因細(xì)胞的不同而不同。
四、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)為什么要用臺(tái)盼藍(lán)染色?
答：參加臺(tái)盼藍(lán)后，活細(xì)胞不上色，臺(tái)盼藍(lán)上色的細(xì)胞呈深藍(lán)色，是不健康或已死亡的細(xì)胞，不能計(jì)數(shù)。
五、測(cè)定細(xì)胞成長(zhǎng)曲線的含義是什么?
答：細(xì)胞成長(zhǎng)曲線是測(cè)定細(xì)胞肯定成長(zhǎng)數(shù)的常用辦法，也是斷定細(xì)胞生機(jī)的重要目標(biāo)，是培育細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)。由于細(xì)胞太小，無(wú)法測(cè)單個(gè)細(xì)胞的成長(zhǎng)狀況，所以測(cè)細(xì)胞集體的成長(zhǎng)曲線。
六、細(xì)胞成長(zhǎng)曲線測(cè)定周期是幾天?
答：一般是一個(gè)星期。
七、細(xì)胞成長(zhǎng)曲線還有其他辦法制作嗎?
答：當(dāng)然有。我們說(shuō)到較多的是直接計(jì)數(shù)的辦法，除此以外還有相對(duì)計(jì)數(shù)的辦法，該類辦法首先要制作規(guī)范曲線，標(biāo)定細(xì)胞數(shù)和某個(gè)變量的函數(shù)，然后我們只需要測(cè)定每天這個(gè)變量的值便能夠核算出細(xì)胞數(shù)。常用的是MTT、CCK8等比色的辦法。
八、為什么細(xì)胞計(jì)數(shù)多天，細(xì)胞數(shù)沒有添加反而削減?
答：一般細(xì)胞傳代后，會(huì)有一個(gè)成長(zhǎng)緩慢的潛伏期，細(xì)胞不增殖，而細(xì)胞會(huì)有正常的死亡，故細(xì)胞數(shù)不添加反而削減。
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